這在ImageJ里是比較常用的操作,既然兩天了也沒有人回答,我就嘮叨一下吧。
基本上,沒有特別要求,怎么照都行,可以疊加。
廣義上,共聚焦圖像的疊加,通常有不同兩種情況:
1,multichannel,雙重或多重熒光標記,不同通道不同顏色熒光,這種疊加可稱為merge;
2,stack,多層光切片的疊加,一般是Z軸方向,可以有多種算法,這種疊加可稱為project。
當然,這兩種情況也可以共同出現(為簡單見我這里只說單純情況),一般這兩種情況的處理方法不同。
我感覺你是第一種情況。我就按這個說吧:
可以根據你所使用的共聚焦提供的軟件設置每個通道為不同的顏色。其實,本質上來說都是偽彩(pseudocolor),就算你用同一種顏色,之后在ImageJ里也可以隨意改變成你期望的兩種顏色。
我通常用leica的機器,你可能能用別牌子的機器,這都沒有關系。一般機器輸出的圖片都可以從中分離或者在confocal自帶的軟件里導出成.tiff格式,這個格式大多軟件都認,也包括ImageJ。
現在我默認你已經有了兩個來自于同一個樣品的不同熒光通道的tiff圖片,現在你在imageJ里面依次將它們打開,現在到ImageJ主界面菜單欄——》Image——》color——》mergechannels選中,會跳出colormerge對話框,有幾個選項我不多講了,按著軟件的默認OK就行了。試試吧
另外,如果你是Zeiss的confocal輸出的文件,ImageJ(V1.45)有現成的plugin,操作會更方便一點。
還有問題的話不妨先看看help。